Plasmide sind kleine, ringförmige DNA-Moleküle, die neben der DNA des "Bakterienchromosoms" innerhalb einer Bakterienzelle vorliegen können. Diese DNA-Moleküle dienen in der Gentechnik als Vektoren um Fremd-Gene in das Bakterium einzubringen. Im Praktikum soll die Isolation eines Plasmids aus einer Bakterienkultur durchgeführt werden. Der Nachweis der isolierten Plasmid-DNA erfolgt durch Agarose Gel Elektrophorese.
Restriktionsendonukleasen sind Enzyme, die DNA-Moleküle aufschneiden, wobei sie die Schnittstelle an einer spezifischen Nukleotidsequenz erkennen. Man nutzt sie zur Herstellung rekombinanter DNA-Moleküle und schneidet mit ihrer Hilfe den ringförmigen DNA-Strang eines Vektors (z.B. eines Plasmids) an einer bestimmten Stelle auf. In diesem Experiment werden 3 verschiedene Restriktionsendonukleasen verwendet um isolierte Plasmid-DNA zu verdauen. Die resultierenden DNA Fragmente werden anschließend elektrophoretisch getrennt und ausgewertet.
Die Polymerase-Kettenreaktion (kurz: PCR für engl. Polymerase Chain Reaction) ist eine Methode, um DNA zu vervielfältigen, ohne einen lebenden Organismus, wie z.B. E.coli zu benutzen. PCR wird in biologischen und medizinischen Laboratorien für eine Vielzahl verschiedener Aufgaben verwendet, zum Beispiel für die Erkennung von Erbkrankheiten, für das Erstellen und Überprüfen genetischer Fingerabdrücke, für das Klonieren von Genen und für Vaterschaftstests. Im Versuch vervielfältigen die Teilnehmer eine vorgegebene DNA (Template) mittles PCR. Die PCR Produkte werden dann mittels Agarose Gel Elektrophorese nachgewiesen.
und nun wir in Aktion :
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